Spectroscopie de Corrélation de Fluorescence (FCS)

 

 

 

 

La FCS repose sur l'analyse des déviations stochastiques de l'intensité de fluorescence causées par tout processus dynamiques se déroulant lorsque des molécules individuelles diffuse librement dans un volume d'excitation crée par un faisceau laser fortement focalisé (A). Les fluctuations (B) sont autocorrélées à différentes valeurs de de temps de retard (τ). La probabilité de détection d'un photon au temps de retard τ, si le premier évenement est détecté au temps zéro, est directement proportionelle à la fonction d'autocorrélation résultante (voir figure). L'analyse de la fonction d'autocorrélation (C) informe sur les processus à l'origine de ces fluctuations de fluorescence, tels que les transitions vers l'état triplet et la translation de molécules à travers le volume de détection qui est caractérisée par un temps de diffusion duquel peut être déduit un coefficient de diffusion.

 

La corrélation croisée de deux signaux indépendants présente un développement interéssant de la FCS sous le terme de Spectroscopie de fluorescence à corrélation croisée (fluorescence cross-correlation spectroscopy = FCCS). La FCCS à deux couleurs concerne la corrélation croisée des deux signaux provenant de deux molécules avec des marquages fluorescent distincts et est très utilisé pour l'étude des interactions moléculaires. La FCCS spatiale s'interésse à la corrélation croisée entre deux volumes d'observation très proches ou se recouvrant et est utile pour analyser les processus de diffusion très lents ou dirigés (flux), même si son implémentation est difficile. La spectroscopie à corrélation de temps de vie de fluorescence (fluorescence lifetime correlation spectroscopy = FLCS) permet la séparation des contributions de différents fluorophores avec des temps de diffusion similaires sur la base de temps de vie de fluorescence distincts.

 

 

 

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<span style="" color:"="">Version initiale : Yann Roche - décembre 2012



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